一．           产品介绍

RYBIOTRANS是一种多用途的转染试剂，该试剂由可生物降解的超高分枝的化学衍生物与其它组分复合而成。对各种贴壁细胞有较高的转染效率。可用于转染大分子DNA、小分子寡核苷酸和siRNA等。特别适用于携带质粒或DNA、RNA片段用于注射小鼠的静脉、皮下和腹腔等部位进行体内动物实验。与传统的脂质体相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要表现为：
l         对绝大多数贴壁细胞有较高的转染效率
l         操作简单，结果重复性好
l         转染试剂/DNA复合物的形成时间只需10-15min，可以在最短的时间内完成转染
l         转染试剂/DNA复合物可以直接加入完全细胞培养基中，
l         需要较少的转染条件优化

二．运输与储存
运输：常温    储存：2－8℃   一年

三．转染前的准备与注意事项

1.细胞接种
为了取得较高的转染效率，推荐使用在50代以内的细胞进行转染实验。要求在转染前24小时对细胞再次传代，在培养基中加入抗生素对转染效果没有影响。转染时细胞密度一般应为60-80%，但这因细胞株的不同而变化，对最常用的细胞株建议细胞密度为70-90%。以24孔板的转染为例，最理想条件是在转染前24小时，每孔接种(500 µl )0.5－2×10⁵个细胞。在大多数情况下，如果在细胞贴壁后(接种几小时后)即进行转染，也可以得到相近的结果。表1列举了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。

2．DNA的质量
为了取得较高的转染效率，推荐使用高纯度的质粒。建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测，DNA含量 (μg/mL)=50 × (260 nm的读数) × 稀释倍数，通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度，OD260/OD280值应该≥1.8。转染时不同品质的DNA用量不同，以24孔板转染为例，使用酚氯仿沉淀法提取的质粒DNA一般每孔需要加入≥2μg质粒DNA，而使用Qiagen分离柱或类似方法提取的质粒DNA一般每孔需要加入0.5-1μg质粒DNA。

三．使用说明

1、    转染前将所有试剂置于室温。

2、    转染试剂的用量
在体外细胞转染试验中，对于接种细胞密度在60%-90% 之间的实验样本，可通过预试验使  转染试剂（ul）∶DNA（μg）= 2∶1 － 6∶1之间选择最佳的比例。对大多数细胞 转染试剂（μl）∶DNA（μg）的推荐比例为2∶1。

3、  制备 转染试剂-DNA 混合物：

l         1 μg DNA质粒稀释于50 μl 不含血清和抗生素的培养基中，轻轻混匀。

l         2 μl转染试剂稀释于50 μl 不含血清和抗生素的培养基中，轻轻混匀。

l         50μl转染试剂稀释液滴加到50 μl DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育     10-15 分钟，获得100 μl 转染试剂/DNA 复合物，立刻加入要转染的细胞。

l         100μl 转染试剂/DNA复合物加到每孔中并轻轻摇动使其与新鲜的培养基均匀混合。

备注： 转染时，一定要把  转染试剂+培养基  加入到  质粒+DMEM  中，顺序不可错，轻微混匀，静止10-15分钟